首頁
產品服務
心血管疾病系列腎病系列腫瘤系列心血管用藥系列腎病用藥系列二代測序商業(yè)試劑盒
科研合作
新聞中心
關于我們
微小殘留病(MRD)的檢測方法
發(fā)布時間:2020-09-16 19:00:00來源:

血液腫瘤是一種高度異質性疾病,大部分患者經過治療后可以達到完全緩解。血液學完全緩解后,患者的骨髓、外周血或其他髓外組織中仍然存在著少量的白血病細胞,稱為微小殘留?。╩easurable residual disease,MRD)。MRD在血液腫瘤復發(fā)預測,療效評估方面發(fā)揮著十分重要的作用(圖1),白血病細胞負荷越高,復發(fā)風險越大,藥物療效越差。


2501.png

圖1 MRD監(jiān)測在白血病復發(fā)預測中的意義


 目前的MRD監(jiān)測方法主要有多參數(shù)流式細胞術(multiparameter flow cytometry,MFC)、熒光實時定量聚合酶鏈式反應(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)和二代測序(next generation sequencing,NGS)。


01

MFC監(jiān)測MRD

白血病細胞具有異常的抗原表達,稱為白血病相關免疫表型(leukemia-associated immunophenotypes,LAIPs)。LAIPs分為抗原非同步表達、抗原的跨系表達、正??乖磉_強度改變和抗原表達缺失4類。流式細胞術以LAIPs為基礎進行MRD監(jiān)測。


MFC監(jiān)測MRD的適用范圍廣,檢測周期短,特異性高,但是監(jiān)測指標缺乏標準化,需要專業(yè)分析人員,且治療后的殘留白血病細胞免疫表型可能發(fā)生改變(抗原漂移),造成假陽性或假陰性。


02

 qPCR監(jiān)測MRD

正常細胞與血液腫瘤細胞具有不同的分子生物學異常,正常細胞中不表達或低表達的mRNA轉錄本在白血病細胞中呈現(xiàn)高表達,例如急性髓系白血病患者中的WT1高表達,正常B/T淋巴細胞的IG/TCR重排多樣化,B/T細胞淋巴瘤的IG/TCR重排單一化(圖2);血液腫瘤細胞中還存在基因突變和基因融合。在具有基因突變、融合、過表達和重排的血液腫瘤患者中,可采用qPCR技術進行MRD監(jiān)測。


qPCR靈敏度高,特異性好,監(jiān)測速度快,但是覆蓋面窄,需要多種不同的引物和探針,且受擴增效率和背景表達的影響較大。由qPCR發(fā)展而來的液滴數(shù)字PCR屬于絕對定量方法,可檢測基線復雜和含量極低的核酸序列,但也存在覆蓋面窄,標志物多等局限性。


2502.png
2503.png

圖2 正常細胞與B/T腫瘤細胞基因重排


03

NGS監(jiān)測MRD

血液腫瘤患者體內經常存在多個突變,而qPCR技術通量低,一般一次只能檢測一個外顯子突變。NGS技術通量高,可同時檢測多個突變,提高效率的同時也能更全面地了解患者的遺傳信息。然而,NGS的檢測費用較高,還可能引入一些原始樣本基因組并不存在的錯誤,導致假陽性。因此,檢測實驗室應建立標準化實驗和數(shù)據(jù)解讀流程,提高檢測的準確率。


小結 -


MRD監(jiān)測技術的發(fā)展迅速,臨床應用也趨于常規(guī)。目前的MRD監(jiān)測方法較多,每種方法都有各自優(yōu)點和局限性(表1)。血液腫瘤相關診療指南推薦,在治療的多個階段多頻次進行MRD監(jiān)測,包括誘導治療完成后、鞏固治療期間、移植前、全部治療完成后,從而更好地了解白血病的動態(tài)變化、更精確地進行風險評估,輔助治療方案選擇。


表1 MRD監(jiān)測方法的特點

2504.png


由于每個患者白血病細胞的特異標志不盡相同,加之白血病細胞還帶有很多正常細胞的標志以逃脫機體的免疫監(jiān)視。因此,如何確定白血病細胞特有的標志最為關鍵。MRD監(jiān)測的前提是在初診時找到患者白血病細胞特有的標志,例如,采用流式細胞學方法,首先要在初診時分析白血病細胞的十幾種標志,然后找出幾種標志的特定組合作為該白血病細胞的特有標志,后續(xù)進行追蹤觀察。


參考文獻

1. van Dongen JJ, van der Velden VH, et al. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood, 2015, 125(26): 3996-4009.

2. Ye B, Smerin D, et al. High-throughput sequencing of the immune repertoire in oncology: applications for clinical diagnosis, monitoring, and immunotherapies. Cancer lett., 2018, 416: 42-56.

3. Schnittger S, Kern W, et al. Minimal residual disease levels assessed by NPM1 mutation-specific RQ-PCR provide important prognostic information in AML. Blood, 2009, 114(11): 2220-2231.

4. Roloff GW, Lai C, et al. Technical advances in the measurement of residual disease in acute myeloid leukemia. J Clin Med, 2017, 6(9): 87.


推薦新聞

咨詢服務熱線

+86 10 5849 9280

? Copyright - 安智因 京ICP備18055458號-1