《European Journal of Biochemistry》上曾發(fā)表了一篇題為“Preferential pre-mRNA utilisation of an upstream cryptic 5' splice site created by a single base deletion mutation in exon 37 of the FBN-1 gene”的文章，該文章在一名馬凡綜合征患者及其之前未確診的父親身上，發(fā)現(xiàn)原纖維蛋白-1基因37號外顯子的一個(gè)堿基（A4704）雜合缺失。雖然是移碼突變，但是功能學(xué)顯示未發(fā)生無義介導(dǎo)的mRNA降解（NMD），而是產(chǎn)生了隱匿剪接位點(diǎn)，出現(xiàn)了異常轉(zhuǎn)錄本，發(fā)生了顯性負(fù)相效應(yīng)，而非單倍劑量不足。

在一名馬凡綜合征患者及其之前未確診的父親身上，發(fā)現(xiàn)原纖維蛋白-1基因37號外顯子的一個(gè)堿基（A4704）雜合缺失。在培養(yǎng)的先證者皮膚成纖維細(xì)胞的前體mRNA加工過程中，該缺失在37號外顯子中產(chǎn)生了一個(gè)隱匿的5'剪接位點(diǎn)，該剪接位點(diǎn)優(yōu)先于正常的5'剪接位點(diǎn)。突變體mRNA顯示從37號外顯子的3'端缺失了48 bp，預(yù)測將恢復(fù)突變體mRNA中的閱讀框，并導(dǎo)致從原纖維蛋白-1分子的中央八半胱氨酸重復(fù)基序中缺失了16個(gè)氨基酸序列。有趣的是，37號外顯子中隱匿的5'剪接位點(diǎn)和正常的5'剪接位點(diǎn)在剪接位點(diǎn)選擇上基本一致。結(jié)合當(dāng)前有關(guān)前體mRNA剪接機(jī)制的理論，討論了優(yōu)先利用隱匿位點(diǎn)的問題。反轉(zhuǎn)錄PCR分析表明，在患者皮膚成纖維細(xì)胞中，錯(cuò)誤剪接的突變mRNA的穩(wěn)態(tài)水平與正常等位基因的水平接近。此外，來自免疫印跡和脈沖追蹤生物合成標(biāo)記的證據(jù)表明，細(xì)胞合成和分泌接近正常數(shù)量的原纖維蛋白-1。然而，與未受累個(gè)體培養(yǎng)的對照細(xì)胞相比，先證者的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞外基質(zhì)中通過生物合成或免疫熒光檢測到少量的原纖維蛋白-1。因此，在這種培養(yǎng)體系中，稍短的突變體原纖維蛋白-1分子似乎對正常纖維蛋白-1分子并入微纖維產(chǎn)生了強(qiáng)大的顯性負(fù)相效應(yīng)。這種在細(xì)胞培養(yǎng)中對微纖維合成的嚴(yán)重抑制與先證者的‘典型’表型形成對比，表明影響微纖維形成的因素在體內(nèi)和體外環(huán)境中可能存在很大差異。

圖1. 單堿基缺失在37號外顯子中產(chǎn)生隱匿的剪接位點(diǎn)

注：（a）行顯示了通過先證者基因組DNA的一個(gè)等位基因中A核苷酸（A4707）缺失，而產(chǎn)生的優(yōu)先利用的隱匿剪接位點(diǎn)的位置。隱匿的和正常的剪接序列被畫線標(biāo)出。（b）行顯示了cDNA序列48個(gè)堿基的缺失（小寫字母部分），編號4700-4747。（c）行顯示了該區(qū)域的正常原纖維蛋白-1氨基酸序列。（d）行顯示了預(yù)測的因隱匿剪接而導(dǎo)致的原纖維蛋白-1中16個(gè)氨基酸（編號1567-1572）的缺失。注意，閱讀框保持不變。（e）行顯示了如果將正常的5'剪接位點(diǎn)用于突變的前體mRNA，則預(yù)測原纖維蛋白-1被截短。

圖2. 皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的免疫熒光染色

注：將來自對照個(gè)體（A和C）和先證者（B和D）的細(xì)胞培養(yǎng)至融合后7天，然后用抗原纖維蛋白-1單克隆抗體201（A和B）和A5（C和D）染色。放大倍數(shù)：A和B，×95；C和D，×160。Bars = 100 μm。

與其他馬凡綜合征病例一樣，家族性FBN1基因突變與可變表型之間的相關(guān)性尚不清楚。每個(gè)個(gè)體的表型很可能受到與突變的前體mRNA、mRNA和原纖維蛋白-1分子的合成和加工有關(guān)的其他基因產(chǎn)物的組織變異的影響。先證者的皮膚成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)過程中幾乎完全抑制了微纖維的合成，這與先證者不太嚴(yán)重的‘典型’表型形成對比，表明影響微纖維形成的因素在體內(nèi)和體外環(huán)境中可能存在很大差異。有趣的是，如果突變的37號外顯子在正常位置被剪接，則由于存在過早終止密碼子，mRNA可能會迅速降解。此外，如果真的發(fā)生了翻譯，那么最終截短的原纖維蛋白-1分子很可能會在細(xì)胞內(nèi)降解。這將導(dǎo)致功能等同于一個(gè)null等位基因和一個(gè)相對輕微的表型。有一種有趣的可能性：在馬凡綜合征的例子（如本文所述）中，個(gè)體不同組織中突變FBN1基因剪接模式的變化可能對表型的嚴(yán)重性產(chǎn)生重要影響。